细胞培养常见问题及回答
时间是：2021-10-15 06:25:00 点击次数：634
细胞培养常见问题及回答
1. 谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－ 谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
2. 什么培养基中可以省去加酚红？
酚红在培养基中被用来作为PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
3. 用台盼兰计数活细胞？
用无血清培养基把细胞悬液稀释到 200－2000 个/毫升，在 0.1 毫升的细胞中加入 0.1 毫升的 0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。
4. 消除组织培养的污染？
当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母， 把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查 HEPA 过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B 和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
（1） 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。
（2） 分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B 推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
（3） 每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。
（4） 确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度 2－3 倍浓度的抗生素的培养液培养细胞 2－3 代。
（5） 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
（6） 重复步骤 4。
（7） 在无抗生素的培养基中培养 4－6 代，确定污染是否以已被消除。
7. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？
GIBICO 的胎牛血清 没有预老化，储存在 2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
8. 离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入 EDTA 的目的是什么？ 二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用 EDTA 清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
10.胞培养的最适 PH 值和渗透压是多少？
生长培养基的PH 值对细胞的增值和病毒或重组蛋白的生产均会产生影响。对于大部分鳞翅类昆虫细胞系， 在 PH 值 6.0－6.4 范围的大部分应用效果良好。培养鳞翅类昆虫细胞系时，培养基的最适渗透压是 345－
380mOsm/kg.。为保证可靠和持久的细胞培养方式，减少技术问题，保持 PH 值和渗透压在以上所列的范围之内。
